2.1. Aislamiento y expansión celular
En el laboratorio (clean room), bajo una campana de flujo laminar, se extrae el material de la biopsia en forma estéril y se transfiere a una placa de Petri.
Con ayuda de pinza y escalpelo se disgrega la muestra cutánea y se sumerge en una solución de colagenasa.
Luego de la digestión enzimática la suspensión es filtrada y sembrada en frascos de cultivo en el medio correspondiente.
El cultivo se incuba a 37ºC en atmósfera de 5% CO2 y se mantienen realizando dos cambios del medio semanalmente. Cuando las células llegan a confluencia el cultivo es repicado. Este procedimiento se repite tantas veces como sea necesario hasta alcanzar el número de células requerido. Una vez alcanzado el número de células se le informará al médico referente.
Las células serán resuspendidas en medio de transporte y serán enviadas al centro médico correspondiente en un tubo rotulado con los datos del paciente dentro de una caja acondicionada a tal fin.

3. Test de control de proceso
3.1. Recuento de células y evaluación de viabilidad con azul de Tripan
Se toma una alicuota de la suspensión celular y se mezcla con el mismo volumen de una solución de azul de Tripan. Contar las células en cámara de Neubauer.
Las células viables no toman el colorante, mientras que las células muertas se tiñen de azul, por lo tanto pueden diferenciarse y de este modo obtener el porcentaje de células viables.

3.2. Análisis por citometría de flujo
Luego de recontar las células se resuspenden aproximadamente 500.000 células en 700 µl de PBS.
Pipetear 100 µl de la suspensión celular en tubos apropiados para el análisis por citometría de flujo conjuntamente con 5 µl de anticuerpo específico ( anti colágeno humano). Incubar 15 minutos a 4ºC.
Agregar 2 ml de PBS y centrifugar 10 minutos a 600 g (1.200rpm).
Descartar el sobrenadante y resuspender las células en 200 ml de PBS.
El resultado será analizado empleando el sofware “System II” en un citómetro Coulter EPICS XL.

3.3. Controles bacteriológicos y de Micoplasmas
Tanto el medio de transporte en el que arriba el material de la biopsia al laboratorio como el medio de cultivo correspondiente a la última cosecha celular serán sometidos a análisis bacteriológico y de micoplasmas para evaluar su esterilidad.

4. Transporte

El día de la cirugía las células cosechadas de los frascos de cultivo deben ser resuspendidas en 200 µl de medio de transporte. Transferir la suspensión celular a una ampolla de transporte que deberá ser etiquetada con los datos del paciente, el número de células y la fecha de vencimiento del material.
Las ampollas de transporte serán colocadas en una caja con elementos enfriantes y transportada al centro médico correspondiente acompañada de un formulario. Este formulario deberá ser completado y la copia 1 será entregada al centro médico y la copia 2 será remitida al laboratorio para su archivo.

5. Documentación

Los resultados del control del proceso deben ser volcados a las planillas correspondientes y enviados junto al producto.
La documentación de los ensayos bacteriológicos se archivará en el laboratorio en la carpeta correspondiente a cada paciente.
El resultado de la inmunomarcación será enviado junto al producto celular para el implante y se archivará una copia en la carpeta del paciente.